图1表示含有目的基因
的
片段长度(
即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有
Ⅰ、
Ⅰ、
Ⅰ、
Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为
。请回答下列问题:

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。
(2)若用限制酶
Ⅰ完全切割图1中
片段,产生的末端是末端,其产物长度为。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被
碱基对替换,那么基因
就突变为基因
。从杂合子分离出图1及其对应的
片段,用限制酶
Ⅰ完全切割,产物中共有种不同
片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是。