研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究,肺部细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示,据图回答。
1).在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体,原因是 ;如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成,脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为 。
2).图甲中在构建重组载体时,酶切目的基因和酶切质粒时,所用的限制酶可以不同,但是产生的粘性末端必须是 。
3).图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是 , 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是 ,这 两种酶作用的化学键都是 。
4).原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂,空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开),重新接种到另外的培养器皿内再进行培养,这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时,需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
5).研究发现,let-7基因能影响RAS基因的表达,其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析,其作用机理是 。