可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为代)。
(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除,因为后者产生的会抑制侧芽的生长。
(2) 为筛选出已转化的个体,需将代播种在含的培养基上生长,成熟后自交,收获种子(称为代)。
(3) 为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将代播种在含的培养基上,获得所需个体。
(4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起,需将该突变体与植株进行杂交,再自交代后统计性状分离比。
(5)若上述的插入造成了基因功能丧失,
从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 。
(6)根据的已知序列,利用技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是:提取植株的,用限制酶处理后,再用将获得的片段连接成环(如右图)以此为模板,从图中四种单链片断中选取作为引物进行扩增,得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
图表 1环状示意图
A、B、C、D表示能与相应链互补、长度相等的单链片段;箭头指示合成方向。