海洋中的发光细菌具独特的生理特性，可作为环境监测的指标生物。
I．（1）对发光细菌纯化、培养常用               法接种（答一种）。实验结束后。对使用过的培养基应进行       处理。
（2）通过PCR技术扩增发光基因的三个步骤是：               。
Ⅱ．现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：
实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定：当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示。
实验材料：明亮发光杆菌冻干粉、待测海水水样、2％NaCl溶液、3％NaCl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等。
实验步骤：
（1）配制发光菌悬液：将少许明亮发光杆菌冻干粉和0．5mL 2％NaCl溶液加入5mL小试管中，摇匀。
（2）抑光反应：按照下表配制海水样品稀释液。

组别	1	2	3	4	5
3％NaCl溶液（ml）		4.74	4.49	4.24	3.99
海水样品（ml）		0.25	0.50	0.75	1.00
发光菌悬液（ml）		0.01	0.01	0.01	0.01
混合液中海水浓度（％）		0.05	0.10	0.15	0.20

       ①l号试管中应加入：3％NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为         mL。
②各试管静置15min后，                   。
（3）计算相对抑光率：按照公式T％=            计算各组相对抑光率。
（4）如果测得上述各组相对抑光率如下

组别	1	2	3	4	5
相对抑光率（％）	0	6	13	17	23

①请绘制随海水浓度变化相对抑光率的变化曲线。
②根据结果可以判断待测样品               。