番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶(PG)有关,科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄,获得转基因延熟番茄,是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图(a mpr为抗氨苄青霉素基因),其中1~ 4是培育过程中的相关步骤,I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。
例1 在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时,若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后,反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,实际操作中,一般应选用限制酶___________,分别同时对_____________进行切割。
例2 通过农杆菌转化法,可将带有目的基因的T-DNA(重组质粒)导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因,通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上,使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄,其后代并非每一个个体都含目的基因,原因是 。
(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因,可以采用特定的DNA分子探针进行检测,也可以向植物组织培养基中加入_______________,以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。
向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后,发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶(PG),其原因最可能是____________。