小鼠基因敲除技术获得2007年诺贝尔奖，该技术采用基因工程、细胞工
程、杂交等手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合
成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠。
（1）体外获得突变基因b的克隆的技术称_________________。
（2）基因敲除过程中的受体细胞是__________________细胞。外源基因是否导入受体细胞，可利用重组质粒上的 检测。
（3）将导入目的基因的受体细胞进行克隆，在某时期提取细胞培养液，测定每个细胞的DNA含量，结果如下图。在图中的B、C、D中，表示处于G2和M期的是 ，在_______期进行作物（小麦、水稻）诱变育种工作实践可取得良好效果的是。
（11分) 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题。
(1)制备单克隆抗体过程中要用到________和________技术。
(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的________免疫
(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________(2分)成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②在HAT培养基上存在_________种细胞，最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是____________________________________(2分)。
(4)此过程生产的单克隆抗体可以与____________特异性结合，从而诊断早孕。
科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：
（1）从黑鼠体内获得体细胞经诱导因子的作用成为具发育的 的细胞，其培养过程经历 和 培养。
（2）在胚胎卵裂过程中，总体积 、有机物总量 ；孵化发生在 。
（3）克隆鼠与黑鼠的遗传物质 （完全相同、部分相同）,
原因是 。
(11分)“白菜—甘蓝”是科学家用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易储存等优点。如图是“白菜—甘蓝”培育过程示意图，请完成下列问题：
(1)培育成白菜—甘蓝植株，采用的技术手段是________。该过程应用的原理是＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
(2)要制备“白菜—甘蓝”的人工种子，要在d步骤选取具有生根、发芽能力的________结构，包裹上人工种皮即可。
(3)在d过程培养中，培养基的成分通常包括水、______、有机营养和________等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证__________________。
(4)在a过程中诱导原生质体融合最常用的诱导剂是______________．
(5)要获得图中白菜和甘蓝的原生质体，首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。用以下材料和用具：紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等,可除去细胞壁。在实验过程中要选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是
_______________________________________________________(2分)。
（6）采用特异性引物对另两种植物花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种及纯种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中后代性状不分离的是 。
(9分)通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞中，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。请回答下列问题：
(1)下列所示的黏性末端是由__________种限制酶作用产生的。
(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因工程操作步骤中的第三步，即__________。获取目的基因时，如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接__________。
(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体是__________。
(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的技术是__________；其次还要检测__________，方法同样是采用分子杂交技术；最后检测__________，方法是__________杂交。
(13分)Ⅰ．如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径。据图结合所学知识回答下列问题：
(1)为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来，所选择的质粒上应该具有__________________。
(2)培育转基因羊的过程中，科研人员通过感染或____________技术将重组质粒M转移到受体细胞A中，受体细胞A应该是________细胞。③过程中还用到了__________________技术。
(3)受体细胞B应该是莴苣的________(填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵)，导入该细胞后，需对该细胞进行培养，经________过程形成愈伤组织。
(4)莴苣为双子叶植物，过程②常用的方法是________________；过程⑥常用的方法是用________来处理大肠杆菌，使其易于吸纳重组质粒M。
Ⅱ、下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
(1)将两端用E1切开的APr基因与用E1切开的质粒X-1混合连接，连接后获得的质粒类型有________。(可多选)
| A．X-1 | B．X-2 |
| C．X-3 | D．X-4 |
(2)若将上图所示X-1、X-2、X-3、X-4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在四环素的培养基不能生长的大肠杆菌细胞类型有________、________、__________。
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