下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点,ampR为青霉素(抗生素)抗性基因,tctR为四环素(抗生素)抗性基因,P为启动因子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图(二)为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题:
(1)在基因工程中常用的工具有三种:一是用作切取目的基因的 酶;二是将目的基因与运载体拼接的 酶;三是作为运载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体(质粒)进行拼接形成重组DNA,理论上讲,重组DNA可能有“ ”、“ ”、“ ”三种,其中有效的(所需要的)基因表达载体是 ,因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图(一)所示的质粒拼接形成的3种拼接产物(基因表达载体)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(基因表达载体)是 。
(4)有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时,首先需要进行转录,RNA聚合酶识别和结合的位点是图(一)中的 。在动物基因工程中,将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是 。在植物基因工程中,将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是 。是因为这种微生物很容易侵染到
中,从而把它的Ti质粒上的 转移到受体细胞染色体的DNA上。
(5)在基因工程中,作用于图(二)所示a位置的酶是 ;作用于b位置的酶是
。