1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。如下图，请据图回答问题。
(1)此图表示的是采取______________方法获取__________________________基因的过程。
(2)图中①DNA是以____________为模板，_____________形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的____________________________。
(3)图中②代表的是_________________酶，在它的作用下将质粒切出_______________末端。
(4)图中③代表重组DNA，含_______________基因。
(5)图中④表示的过程是___________________________________
根据下述材料，回答下列问题：
棉铃虫是一种严重危害棉花的害虫。我国科学家发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌，它能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死。而此毒蛋白对人畜无害。通过基因工程的方法，我国已将毒蛋白基因移入棉株细胞内并实现成功表达。由于棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡，所以该棉花新品种在1998年推广后，已经取得了很好的经济效益。
（1）基因工程的核心是 。将抗虫基因导入棉花细胞体内最常用的技术是 。“转基因抗虫棉”的抗虫变异，属于可遗传变异类型中的 。
（2）题中“毒蛋白基因移入棉株细胞内并实现成功表达”中的“成功表达”含义是指： 。
（3）与杂交育种、诱变育种相比，基因工程培育新品种的主要优点是： 。
请回答下列有关单克隆抗体的问题：
（1）从免疫的小鼠脾脏细胞中获取B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合，形成 细胞，该细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速 特点，又具备淋巴细胞的 特点，经过多次筛选，并通过体内培养或体外培养生产得到所需要的单克隆抗体。
（2）在单克隆抗体的制备过程中，运用的技术手段是 、 。
（3）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长至细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，可以用 酶处理；培养液添加一定量的 ，以防止杂菌污染；在含有5% CO2的培养箱中进行培养，CO2的主要作用是 。
（4）单克隆抗体与普通血清抗体相比较，最大优点是 ，可大量制备。
长期以来优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程技术和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机。下面是科学家通过这两种方法快速繁殖良种奶牛的过程，请据图回答：
（1）在试管牛E和克隆牛G的培育过程中均用到的现代生物工程技术有 和 。
（2）在体外受精时，精子首先要进行 处理，卵细胞则要培养到 （时期）才能与精子结合。判断卵子是否受精的重要标志是 。防止多精入卵有两道屏障，它们分别是 和 。
（3）胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生 反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。胚胎移植的优势在于供体的职责变为 ，繁重而漫长的妊娠和育仔的任务由受体承担。
（4）通过试管动物技术培养发育为早期胚胎后，对胚胎进行分割时，要特别注意将 均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
请回答下列有关胚胎工程和生态工程的相关问题：
（1）雌性排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于 卵母细胞阶段。当该细胞发育至减数第二次分裂 期时，才具备受精能力。若在卵细胞膜和透明带之间看到两个极体，则表明 过程已发生。
（2）若某对夫妇结婚后发现妻子双侧输卵管堵塞，无奈需进行试管婴儿技术，该技术
括____________和____________。
（3）2015年3月，柴静的纪录片《穹顶之下》引发全国人民对雾霾的关注和讨论，而山西作为产煤大省，生态环境破坏严重，请问矿区废弃地的生态恢复工程的关键在于____________，具体措施有_________________，（举例说明，任答两种）利用了的生态工程原理是_________________。
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