为了解基因结构,通常选取一特定长度的线性DNA分子,先用一种限制酶切割,通过电泳技术将单酶水解片段分离,计算相对大小;然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解,分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。
已知一线性DNA序列共有5000bp(bp为碱基对) |
第一步水解 |
产物 (单位bp) |
第二步水解 |
产物 (单位bp) |
A酶切割 |
2100 |
将第一步水解产物分离后,分别用B酶切割 |
1900 200 |
|
1400 |
800 600 |
|||
1000 |
1000 |
|||
500 |
500 |
|||
B酶切割 |
2500 |
将第一步水解产物分离后,分别用A酶切割 |
1900 600 |
|
1300 |
800 500 |
|||
1200 |
1000 200 |
|||
经A酶和B酶同时切割 |
1900 1000 800 600 500 200 |
(1)该实验设计主要体现了__________________原则。
(2)由实验可知,在这段已知序列上,A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。
(3)根据表中数据,请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。
|
(4)已知BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示,用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamH Ⅰ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作,若干循环后“AGATCC//TCTAGG”和___________序列明显增多,该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。