【生物技术实践——选修l】
柑橘浑身是宝，柑橘中含有丰富的β一胡萝卜素，对夜盲症、皮肤角化有一定疗效，有利于儿童的生长发育并可提高免疫力。柑橘中含有较多维生素C，对坏血病有防治作用。
柑橘皮还可以用来提取橘皮精油，橘皮精油是食品、化妆品和香水配料的优质原料，具有很高的经济价值。请回答下列问题：
（1）一般提取橘皮精油的方法是 法。橘皮在 中的浸泡时间为10h以上，并且橘皮要浸透，这样才会得到高的出油率。
（2）橘皮精油的提取之所以不采取水蒸气蒸馏法，是因为水中蒸馏会导致原料 和有效成分____ 等问题。
（3）如果要对具有优良性状的柑橘树进行组织培养，可选用花药进行离体培养，选择花粉发育至____的花药培养成功率最高。确定花粉发育时期最常用的方法有 法，某些植物的花粉不易着色，则须采用 法。
（4）影响植物组织培养的因素很多，其中最关键的激素有 。
纳米银由于抗菌性能良好而被广泛应用于食物容器、个人护理品等商品中，但其释放到水环境中的风险也引起了研究者的重视。用单细胞小球藻研究纳米银的毒性，开展了如下实验。请回答：
（1）用计数法研究“纳米银”对小球藻生长的抑制情况，结果如图甲，据图可知纳米银在 条件下的毒性更强。实验中需要使用 和显微镜对小球藻进行计数。
（2）用溶氧法进一步探究不同浓度纳米银对小球藻光合作用和呼吸作用的影响，进行了如下实验，结果如图乙。
①材料用具：不同浓度的纳米银溶液、培养液、小球藻若干、密闭锥形瓶若干、溶氧测定仪、蒸馏水等。
②实验步骤：
第一步：将小球藻平均分为A、B两组，A、B组又各分为________个小组并编号，分别放入密闭锥形瓶中培养。
第二步：A、B组中的实验组都分别加________________ ，对照组加等量蒸馏水。
第三步：A组全部放在4000lx光照条件下培养，B组全部放在黑暗条件下培养，温度等其他条件________，
培养10 min后，检测各个锥形瓶中 的变化。
③实验结果：如图乙其中系列1表示水体中的初始溶氧量，则系列________表示A组实验数据。若不加纳
米银，小球藻的总光合作用速率约为 mg/L·min溶解氧。
④综上研究，可得出实验结论： 。
下图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转人赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程，请据图回答问题。
（1）克隆牛“织女”的诞生过程中涉及到的细胞水平的现代生物技术主要有:_________(至少答出两项）
（2）实施基因工程包括四个基本操作步骤，其核心步骤是_______，实现②过程的常用方法是_______
（3）现有-长度为1000碱基对(by)的DNA分子,用限酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000by，说明此DNA分子为_______(填“线性”或“环状”），用KpnI单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子,用EcoRI、KpnI同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分子。请绘出该DNA分子的酶切图谱的示意图:_______(请在图中标明限制酶的类型、酶切位点和碱基长度）。
人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图1是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，图2表示杂种细胞中基因的存在与人体染色体间的关系（注：“+”表示有，“—”表示无），请分析回答：
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（1）制备单克隆抗体用到的生物学技术有 。图1中给小鼠注射的HCG相当于 ，①过程常采用的方法有 （至少答2点）。
（2）科研人员发现形成的杂种细胞中小鼠的染色体会随机丢失，各种杂种细胞保留小鼠染色体的种类和数量是不同的，对杂种细胞进行染色体和基因关系分析的结果如图2。据此推测，2号染色体上有 基因，能无限增殖的各种细胞系有 。（3）在④之前要进行抗体筛选的目的是 ，在此过程生产的单克隆抗体可以与 特异性结合，从而诊断早孕。
2012年10月8日，瑞典卡罗琳斯卡医学院宣布，将2012年度诺贝尔生理学或医学奖授予英国科学家约翰•格登和日本科学家山中伸弥，以表彰他们“发现成熟细胞可以被重新编程为多功能的干细胞”，使人类对细胞和器官发育的认识发生了革命性的变化。通过转入特定基因，可将体细胞诱导形成多能干细胞(iPS细胞）。iPS细胞与胚胎干细胞相似，可以产生各种类型的体细胞。下图是应用iPS细胞技术治疗镰刀型细胞贫血症的技术流程。请回答：
（1）过程①是在体外分离患者的体细胞，需要用_______处理，才能分散成单个细胞;在培养患者体细胞时，通常要在细胞培养液中添加一定量的_______，以防培养过程遭受细菌的污染。
（2）过程②是利用病毒，将4个目的基因（Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc)导入患者体细胞，使其转化成iPS细胞。在这一过程中，迅速扩增4个目的基因的常用技术是_______。然后将4个目的基因与逆转录病毒结合,再将其导入患者的体细胞。在这一过程中,逆转录病毒所起的作用是______________。
（3）与过程③的遗传学原理相同的过程是过程_______
（4）过程④的本质是_______。
（5）过程⑤用于移植治疗的造血干细胞的遗传物质与患者的遗传物质相比,其特点是:______；用于移植治疗时,是否会发生免疫排斥反应？_____________________
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的过程是 。过程②代表的过程是
（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用 、 两种工具酶。
（3）过程⑥发生的生理过程是 、
（4）过程⑦的实验技术名称是 ，过程⑦依据的原理是 。需用 促进X的形成。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒 进行比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
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